3-4-13- واکاوی داده ها. 52
فصل چهارم: نتایج و بحث. 54
4-1- کشت بافت. 54
4-1-1- تشکیل شاخساره نابجا از ریزنمونه های برگ ارقام استاندارد و مینیاتور میخک. 54
4-1-1-1- مواد گیاهی. 54
4-1-1-2- گندزدایی. 54
4-1-1-3- ریزنمونه ها و محیط باززایی. 55
4-2- انتقال ژن با واسطه اگروباکتریوم. 56
4-2-1- آزمایش مقدماتی. 58
4-2-1-1- گزینش با کانامیسین. 58
4-2-2- تولید گیاهان تراریخت. 61
4-2-3- تأیید گیاهان تراریخت با سنجش فعالیت GUS. 63
4-3- آنالیز PCR.. 64
4-4- تأثیر غلظت باکتری. 67
4-5- تاثیر زمان مایه زنی. 71
4-6- تاثیر مدت زمان هم کشتی بر کارایی انتقال ژن. 69
4-7- برهمكنش سه عامل چگالی نوری باکتری، مدت زمان مایه زنی ریزنمونه ها با باکتری و مدت زمان هم کشتی. 73
پیشنهادها. 77
منابع. 78
فهرست جدولها
عنوان صفحه
جدول 1-3- مواد تشکیل دهنده محلولهای پایه محیط كشت MS. 34
جدول 2-3- انواع محیط های کشت مورد استفاده.. 40
جدول 3-3- مواد مورد نیاز برای استخراج DNA ژنومی 47
جدول 4-3- مواد لازم در واكنش PCR.. 51
جدول 5-3- دوره های دمایی واکنش های PCR.. 51
جدول 1-4- اثر غلظت های مختلف BA و NAA بر تعداد شاخساره های نابجای باززایی شده از ریزنمونه های برگ رقم استاندارد’Rendz-Vous‘ . 57
جدول 2-4- اثر غلظت های مختلف BA و NAA بر تعداد شاخساره های نابجای باززایی شده از ریز نمونه های برگ رقم ’Panamera‘.. 57
جدول 3-4- اندام زایی از ریزنمونه های برگ دو رقم میخک روی محیط دارای کانامیسین با و بدون آلودگی توسط Agrobacterium tumefaciens LBA 4404. 60
جدول4-4- مقایسه تعداد و درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در تیمار چگالی های نوری مختلف باکتری.. 70
جدول 5-4- مقایسه تعداد و درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در مدت زمان های مایه زنی ریز نمونه ها با باکتری.. 71
جدول6-4- مقایسه تعداد و درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در مدت زمان های هم کشتی مختلف ریز نمونه ها با باکتری 74
جدول 7-4- مقایسه درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در سه عامل چگالی نوری باکتری، زمان مایه زنی با باکتری و مدت هم کشتی ریز نمونه ها با باکتری در سه سطح مختلف برای رقم ’Rendz-Vous‘ 76
جدول 8-4- مقایسه درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در سه عامل چگالی نوری باکتری، زمان مایه زنی با باکتری و مدت هم کشتی ریز نمونه ها با باکتری در سه سطح مختلف برای رقم ’Panamera‛ 77
فهرست نگارهها
عنوان صفحه
نگاره1-3. جایگاه های برشی پلاسمید pBI121. 43
نگاره1-4- ایجاد شاخساره و پینه پس از گذشت 8 تا 10 هفته از مایه کوبی برای رقم
Rendz–Vous 63
نگاره 2-4- سنجش ژن GUS در رقم ‘Rendz–Vous‘. 64
نگاره 3-4- سنجش ژن GUS در رقم ‘Panamera‘ 65
نگاره 4-4- نتایج آزمون PCR در رقم ’Rendz–Vous‘. وجود گیاهان تراریخت میخک با جفت آغازگرهای ژن GUS برای تأیید وجود این ژن. چاهک M نشانگر kb10، چاهک 1 کنترل منفی، چاهک 2 تا 7 نمونه های مربوط به گیاهان تراریخت و چاهک 8 و 9 مربوط به گیاهان ناتراریخت…. 66
نگاره 5-4- نتایج آزمون PCR در رقم ‘Panamera‘. گیاهان تراریخت میخک با جفت آغازگرهای ژن gus برای تأیید وجود این ژن. چاهک M نشانگر kb10، چاهک 1 کنترل منفی، چاهک 2 تا 4 نمونه های مربوط به گیاهان تراریخت و چاهک 5 تا 7 مربوط به گیاهان ناتراریخت. 67
نگاره 6-4- سنجش ژن GUS در ریزنمونه های پینه (A,B,C) و اندام های گل (D) باززایی شده در رقم ‘Rendz–Vous‘. 68
کوتاههها
| 6- بنزیل آمینو پیورین (6-benzyl amino-9-(tetrahydropyran-2– yl)-9H-purine) | BAP |
| پیشبر ویروس موزائیک گل کلم (Cauliflower mosaic virus promotor) | CaMV 35S |
| آب دوبار تقطیر (Double distilled water) | DDW |
| توفوردی (2و4- دیکلروفنوکسی استیک اسید) (2,4-dichlorophenoxy acetic acid) | 2,4-D |
| اتیلن دیآمین تترا استیک اسید (Ethylene diamine tetra acetic acid) | EDTA |
| بتاگلوکورونیداز (β-Glucuronidase) | GUS |
| محیط کشت لوریا – برتانی (Luria-Bertani Medium) | LB |
| محیط کشت موراشیگی و اسکوگ (Murashige and Skoog Medium – 1962) | MS |
| نفتالن استیک اسید (Naphthalene acetic acid) | NAA |
| ژن نئومایسین فسفوترانسفراز (Neomycin phosphotransferase gene) | nptІІ |
| پلیوینیلپیرولیدون (Polyvinylpyrolidone) | PVP |
| بافر سوکروز تریس اتیلن دی آمین تترا استیک اسید تریتون (Sucrose tris EDTA tritone buffer) | STET |
| بافر تریس بورات اتیلن دیآمین تترا استیک اسید (Tris burate EDTA buffer) | TBE |
| بافر تریس اتیلن دیآمین تترا استیک اسید (Tris EDTA buffer) | TE |
| DNA منتقل شونده (Transferred DNA) | T-DNA |
| تیدیازرون (Thidiazuron) | TDZ |
| وزن / حجم (Weigh / Volume) | W/V |
این مطلب را هم بخوانید :
فصل اول
1- مقدمه
گل هدیه‌ای است به بشر از جانب خالق هستی و موهبتی است برای تعالی روان، اندیشه و خرد انسان. اگر نگاهی به تمدن چندین هزار ساله ایران داشته باشیم، نقش داریوش بزرگ در مجموعه تخت جمشید كه یک دسته گل در دست دارد نشان‌دهنده این است كه فرهنگ مصرف گل از سال‌های دور در بین ایرانی‌ها مرسوم بوده است.
میخك[1] بیش از ٢٠٠٠ سال است كه به دست بشر كاشته می‌شود. این گل یكی از مهم‌ترین محصولات گلكاری دنیا می‌باشد كه هم به جهت زیبایی و گوناگونی رنگ و هم از نظر اقتصادی از اهمیت قابل توجهی برخوردار است (لارسون، 1375؛ Burich, 1996). در ایران كشت و كار میخك از سال‌ها پیش متداول بوده است و در حال حاضر برای تولید گل بریدنی در سطح وسیع كشت می‌شود (خلیقی، 1380).
كوشش‌های وسیعی در سراسر جهان برای بهبود كمیت و كیفیت میخك در جریان است. امروزه اهداف بهنژادی آن شامل: افزایش دامنه رنگ گل‌ها، معرفی شكل‌های جدید گل‌ها، افزایش تحمل به نور كم و دامنه وسیع‌تر دما، بهبود شاخه‌دهی در انواع مینیاتور، افزایش پراكندگی تولید، طولانی كردن عمر پس از برداشت، قوی كردن ساقه، مقاومت به حشرات و بیماری‌ها و افزایش عطر آن می‌باشد (Bunt and
