دانلود پایان نامه كلون و بیان فاكتور نكروز دهنده تومور آلفا (TNF-α) دانلود متن کامل پایان نامه مقطع کارشناسی ارشد رشته بیوتکنولوژی کشاورزی عنوان : كلون و بیان فاكتور نكروز دهنده تومور آلفا (TNF-α)
فهرست جداول
عنوان |
| جدول 1-1 : برخی از پروتئینهای نوترکیب موجود در بازار دارویی………………………..3 |
| جدول 2-1 : معایب و مزایای سیستمهای بیان کننده مختلف جهت تولید پروتئینهای نوترکیب…….12 |
| جدول 3-1 : تعدادی از پروموترهای مورد استفاده برای بیان ژن در E. coli…………..17 |
| جدول 1-2 :ترکیبات مورد نیاز در سنتز cDNA…………………………………………………40 |
| جدول 2-2 : ترکیب واکنش PCR(مقادیر بر حسب میكرولیتر)……………………………..42 |
| جدول 3-2 : واکنش برش آنزیمی………………………………………………………………………46 |
| جدول 4-2 : ترکیبات واکنش اتصال TNF-αو pBR322………………………………..47 |
| جدول 5-2 : فهرست سویه‌های E. coli استفاده شده در این تحقیق……………………..47 |
| جدول 6-2 : ترکیبات محیط کشت LB……………………………………………………………..48 |
| جدول 7-2 : مخلوط واكنش برای برش آنزیمی……………………………………………………54 |
| جدول 8-2 : اجزای واكنش اتصال……………………………………………………………………..54 |
| جدول 9-2 : تهیه 12 میلیلیتر محلول ژل پایین با غلظت 10 در صد………………………57 |
| جدول 10-2 : تهیه 5 میلی لیتر محلول ژل بالا با غلظت 4 در صد………………………….57 |
جدول 11-2 : ترکیبات بافر نمونه (5x)……………………………………………………………..57
|
| جدول 12-2 : ترکیبات بافر الکترود (بافر مخازن)…………………………………………………57 |
| فهرست اشكال | |
| شکل 1-1 : اجزاء اولیه و اصلی وكتور بیانكننده ژن در E. coli………………………………..16 | |
| شکل 2-1: نقشه كروموزوم MHC انسان و ژن hTNFα…………………………………………27 | این مطلب را هم بخوانید : منبع پایان نامه درمورد حقوق شهروندی، آیین دادرسی، دادرسی کیفری |
| شکل 3-1 : ساختار كریستالی TNFα بر گرفته از Protein Data Bank………………..29 | |
| شکل 4-1 : شکل 4-1 مسیر سیگنالی TNFR1………………………………………………………33 | |
| شکل 1-2 : نقشه فیزیکی پلاسمید pBR322 (اقتباس از فرمنتاس)…………………………..46 | |
| شکل2-2 : نقشه فیزیکی پلاسمید pET21a (+) (اقتباس از فرمنتاس)………………………53 | |
| شكل 1-3 : چهار نمونه خون انسان سالم………………………………………………………………..62 | |
| شکل 2-3 : الکتروفورز RNA کل استخراج شده از 4 نمونه خون با بهره گرفتن از کیت……63 | |
| شکل 3-3 : الکتروفورز محصول تکثیر شده cDNA فاکتور نکروز دهنده تومور آلفای نوترکیب با روش PCR و با پرایمرهای R و F بر روی ژل آگارز………………………………..64 | |
| شکل 4-3 : نقشه پلاسمید نوترکیبpBR322tnf ………………………………………………….65 | |
| شکل 5-3 : الگوی برش نخورده پلاسمیدهای نوترکیب pBRtnf در مقایسه با pBR322 فاقد cDNA فاکتور نکروز دهنده تومور آلفا……………………………………………………………66 | |
| شکل 6-3 : الکتروفورز محصول واکنش PCR بر روی پلاسمیدهای نوترکیب بر روی ژل آگارز………67 | |
| شكل 7-3 : نقشه پلاسمید نوترکیب pET21tnf…………………………………………………….68 | |
| شکل8-3 : نتایج الکتروفورز محصول PCRپلاسمید نوترکیب pETtnf با پرایمرهای R و F بر روی ژل آگارز…………………………………………………………………………………………………………………………………69 | |
| شکل 9-3 : الکتروفورز محصول پلاسمید نوترکیب pET21tnf برش یافته با آنزیم های NdeI، HindIII و بریده شده با دو آنزیم NdeI– HindIIIبر روی ژل آگارز…………..70 | |
| شکل 10-3 : توالی نوکلئوتیدی ژن TNF و اسیدآمینهای ترجمه شده آن از یکی از کلون های نوترکیب به دست آمده، pET21tnf………………………………………………………71 | |
| شکل 11-3 : بیان ژن TNF-α انسانی در BL21 E. coli………………………………………72 | |
| شکل 12-3 : مقایسه غلظتهای مختلف IPTG بر روی بیان……………………………………73 | |
| شکل 13-3 : مقایسه بیان پروتئین در زمانهای مختلف بعد از القاء…………………………….73 | |
| شکل 14-3 : نتایج وسترن بلاتینگ بیان پروتئین نوترکیب در غلظتهای 0625/0، 125/0، 5/0و 1 میلیمولار..74 |
علایم اختصاری:
LB: Luria Bertani
NK cell: Natural killer cell
OD: Optical Density
TNF: Tumor Necrosis Factors
TAE: Tris-acetate EDTA
SDS-PAGE: Sodium dodecyl sulfate polyacrylamid gel electrophoresis
RT-PCR: Reverse transcription polymerase chain reaction
rhTNF-α: Recombinant human Tumor Necrosis Factor alpha
MCS: Multiple cloning site
LPS: Lipopolysaccharide
IPTG: Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside
IL: Interleukin
INF: Interferon
EDTA: Ethylene diamine tetra acetic acid
DW: Distilled water
APS: Ammonium persulfate
MS: Multiple Sclerosis
TEMED: N,N,N’,N’-Tetramethylethylenediamine or N,N,N’,N’-Tetramethyl-1,2-diaminoethan
TE: Tris EDTA
TM: Melting temperature
RCLB: Red Cell Lysis Buffer
